Référents : Johan STAUB (johan.staub@inrae.fr) ; Emilie CLEMENT (emilie.clement@univ-lorraine.fr)
Principe
La qPCR (PCR quantitative) et la dPCR (PCR digitale) sont deux techniques de biologie moléculaire permettant de détecter et de quantifier des séquences spécifiques d’ADN. Elles reposent toutes deux sur l’amplification enzymatique d’une région ciblée, grâce à des cycles successifs de dénaturation, d’hybridation des amorces et d’élongation. La qPCR mesure en temps réel l’augmentation du signal fluorescent généré au cours de l’amplification. L’intensité du signal permet de déterminer la quantité initiale de matériel génétique, généralement à partir d’une courbe standard ou d’une méthode comparative. La dPCR, quant à elle, divise l’échantillon en un grand nombre de micro-réactions indépendantes. Après amplification, chaque partition est identifiée comme positive ou négative, permettant une quantification absolue grâce à une analyse statistique. Ces techniques sont sensibles, spécifiques et largement utilisées en diagnostic, recherche et contrôle qualité.
Applications
Diagnostic moléculaire : détection et quantification d’agents infectieux (virus, bactéries, parasites).
Recherche biomédicale : étude de l’expression des gènes et de variations génétiques.
Oncologie : détection de mutations, biomarqueurs et ADN tumoral circulant.
Génétique : identification et quantification de variations du nombre de copies (CNV).
Biologie alimentaire : identification d’espèces, détection d’OGM et recherche de contaminants.
Microbiologie : quantification de microorganismes dans différents échantillons.
Contrôle qualité pharmaceutique : détection de contaminants et contrôle de produits biologiques.
Recherche environnementale : détection et quantification de microorganismes ou d’espèces dans des échantillons environnementaux.