Référentes :
Analytique : Audrey Nuyttens (audrey.nuyttens@univ-lorraine.fr)
Préparative : Tiphaine Dhalleine (tiphaine.dhalleine@univ-lorraine.fr)
Principe
L’activité enzymatique des protéines peut être analysée au moyen de la technologie High Performance Liquid Chromatography ou HPLC (appareillage Acquity Arc) couplée à une détection de
spectrophotométrie de masse (appareillage Acquity QDa) en dosant et identifiant certains produits formés lors de la réaction. La technologie UHPLC (pour ultra-high performance liquid chromatography) fonctionne avec des colonnes remplies de particules de silice de diamètres sub-2 µm et à des hautes pressions de 600-650 bar. Elle offre ainsi une résolution nettement supérieure à celle de l’HPLC classique (100-150 bar). L’UHPLC est donc une technologie tout-à-fait adaptée au fractionnement de mélanges complexes. Elle permet la séparation et le dosage de nombreux métabolites issus du métabolisme primaire et secondaire (acides aminés, glucides, composés aromatiques, acides organiques) ou impliqués dans les mécanismes de détoxication cellulaire (antioxydants comme l’ascorbate, le glutathion, etc.). Les protéines et leurs produits de dégradation (peptides) peuvent également être séparés et dosés.
Applications
Purification de biomolécules
Dosage des biomolécules
Identification des biomolécules par spectrométrie de masse